1、信號(hào)的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸

 

   在壓力作用下，鞘液管中的鞘液被持續(xù)不斷地壓入流動(dòng)室，形成一股穩(wěn)定地連續(xù)的液流，保證了樣本液穩(wěn)定地處于鞘液液流的軸線上，并以單個(gè)細(xì)胞形式直線通過(guò)激光照射區(qū)。激光照射區(qū)又稱測(cè)量區(qū)，是指液流與激光束垂直相交的點(diǎn)。當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物通過(guò)激光照射區(qū)時(shí)，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)部不同物質(zhì)、不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)，這些信號(hào)以細(xì)胞為中心，向空間360。立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)。散射光不依賴任何細(xì)胞樣品的制備技術(shù)，因此被稱為細(xì)胞的物理參數(shù)或固有參數(shù)。散射光又包括前向角散射和測(cè)向角散射。前向角散射與被測(cè)細(xì)胞直徑的平方密切相關(guān)，測(cè)向角散射光對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。熒光信號(hào)也有二種；一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出的微弱熒光信號(hào)，另一種是經(jīng)過(guò)特異熒光素標(biāo)記后的細(xì)胞受激發(fā)照射后得到的熒光信號(hào)。在免疫分析中常要同時(shí)探測(cè)兩種以上波長(zhǎng)的熒光信號(hào)，就采用二向色性反射鏡，或二向色性分光器，來(lái)有效地將各種熒光分開。

 

   經(jīng)熒光染色的細(xì)胞受到適合的光激發(fā)后產(chǎn)生的熒光是通過(guò)光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號(hào)而進(jìn)行測(cè)量的。常用的光電轉(zhuǎn)換器是光電倍增管(PMT)。從PMT輸出的電信號(hào)需要經(jīng)過(guò)放大后才能輸入分析儀器。流式細(xì)胞儀中一般備有兩類放大器。一類是線性放大器，其輸出信號(hào)與輸入信號(hào)成線性關(guān)系。線性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信號(hào)以及代表生物學(xué)線性過(guò)程的信號(hào)，如DNA測(cè)量等。另一類是對(duì)數(shù)放大器，其輸出信號(hào)和輸入信號(hào)之間成常用對(duì)數(shù)關(guān)系。在免疫學(xué)測(cè)量中常使用對(duì)數(shù)放大器。

 

   放大后的電信號(hào)被傳送到計(jì)算機(jī)，再經(jīng)模一數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)轿C(jī)處理器形成數(shù)據(jù)文件，保存在計(jì)算機(jī)上。保存在計(jì)算機(jī)上的數(shù)據(jù)可在脫機(jī)后再進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

 

2、流式細(xì)胞儀分選原理

 

   并不是所有的流式細(xì)胞儀都具有分選功能。流式細(xì)胞儀的分選功能是由細(xì)胞分選器來(lái)完成的。由噴嘴射出的液流柱在電信號(hào)作用下發(fā)生振動(dòng)，斷裂形成均勻的小液滴。根據(jù)選定的某個(gè)參數(shù)由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對(duì)選定細(xì)胞液滴充電，帶電液滴攜帶細(xì)胞通過(guò)靜電場(chǎng)而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，落入收集器中。使用不同孔徑的噴孔及改變液流速度，可能會(huì)改變分選效果。從參數(shù)測(cè)定經(jīng)邏輯選擇再到脈沖充電需要一段延遲時(shí)間。測(cè)定延遲時(shí)間是決定分選質(zhì)量的關(guān)鍵，可根據(jù)具體要求進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

 

3、數(shù)據(jù)的顯示和分析數(shù)據(jù)處理

 

   主要包括數(shù)據(jù)的顯示和分析。單參數(shù)直方圖是使用多的圖形顯示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析。單參數(shù)直方圖是由x、Y二方向組成的二維平面圖。橫座標(biāo)x是所測(cè)的熒光或散射光的強(qiáng)度，用“道數(shù)”(Channel No．)來(lái)表示。選擇的放大器類型不同，標(biāo)度不同。縱座標(biāo)Y通常表示被測(cè)細(xì)胞的數(shù)目。正常情況下，數(shù)據(jù)分析得到的圖形為具有一個(gè)或若干個(gè)峰的曲線圖。對(duì)曲線圖的解釋應(yīng)該具體問(wèn)題具體分析。

 

   除直方圖外，數(shù)據(jù)顯示方式還包括二維點(diǎn)圖、二維等高圖、假三維圖和列表模式等。二維點(diǎn)圖也是比較常用的數(shù)據(jù)顯示類型。它顯示兩個(gè)獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞相對(duì)數(shù)之間的關(guān)系，也是二維平面圖，橫縱坐標(biāo)可以根據(jù)自己選定的被測(cè)參數(shù)自行決定，點(diǎn)的位置表明了細(xì)胞和顆粒具有的二個(gè)被測(cè)參數(shù)的數(shù)值。二維點(diǎn)圖所提供的信息量要大于單參數(shù)直方圖。

 

   數(shù)據(jù)分析的方法大體可分為參數(shù)法和非參數(shù)法兩大類。當(dāng)被檢測(cè)的生物學(xué)系統(tǒng)能夠用某種數(shù)學(xué)模型時(shí)則多使用參數(shù)方法。非參數(shù)分析法不用對(duì)顯示的圖像做任何假設(shè)，也不采用數(shù)學(xué)模型，分析程序可以很簡(jiǎn)單．也可能很復(fù)雜。