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流式細(xì)胞儀的工作原理是:將待測細(xì)胞經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中,在氣體的壓力下進(jìn)入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動室的噴嘴噴出,形成細(xì)胞柱。
流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束,垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下,產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。
這兩種信號同時(shí)被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進(jìn)行檢測,這種信號基本上反映了細(xì)胞體積的大小;熒光信號的接受方向與激光束垂直,經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個不同波長的熒光信號。
這些熒光信號的強(qiáng)度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號,再通過模/數(shù)轉(zhuǎn)換器,將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識別的數(shù)字信號。
計(jì)算機(jī)把所測量到的各種信號進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理,將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上,也可以打印出來,還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析。
檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá),其X軸為測量強(qiáng)度,Y軸為細(xì)胞數(shù)目。
一般來說,流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù),這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),既可以單獨(dú)顯示每個參數(shù)的直方圖,也可以選擇二維的三點(diǎn)圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。
細(xì)胞的分選是通過分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,充電后振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測定細(xì)胞就分散在這些液滴之中。
將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷,當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時(shí),在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),落入各自的收集容器中,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。對分選出的細(xì)胞可以進(jìn)行培養(yǎng)或其它處理,做更深的研究。
美國BD C6型流式細(xì)胞儀
首先C6流式細(xì)胞儀能避免操作新手的一個容易犯的錯誤——調(diào)整電壓,同步化不同的細(xì)胞。C6流式細(xì)胞儀采用的是低壓流動系統(tǒng)(蠕動泵)而不是真空泵,因此可以控制樣本進(jìn)樣速度和活性區(qū)流的直徑,這就能為樣本選擇的活性流區(qū)的大小。
C6的探測器不但可靈敏的捕獲前散射光和旁散射光,還有四個可調(diào)光學(xué)濾光片的熒光探測器??梢詫?shí)時(shí)收集1600萬個通道的數(shù)據(jù),寬的動態(tài)范圍消除了對探測器進(jìn)行補(bǔ)償?shù)谋匾?,?dāng)使用Cflow軟件的Zoom function模式觀察一個特定通道時(shí),其他數(shù)據(jù)仍然被監(jiān)測并且記錄到數(shù)據(jù)文件。
美國BD C6型流式細(xì)胞儀安裝和維護(hù)簡單。系統(tǒng)擁有自動除污和清洗流路程序。當(dāng)關(guān)閉主機(jī)時(shí),自動化系統(tǒng)會自動用清洗液清洗流路系統(tǒng),然后再使之充滿鞘液。鞘液會保持在流路系統(tǒng)中,直到下次開機(jī)。在使用過程中,如果需要啟動清洗流程,那么點(diǎn)擊一下鼠標(biāo)就可。
由于C6流式細(xì)胞儀不使用加壓流動系統(tǒng),可容納多種類型的管子,包括任何品牌的12×75mm管和微型的離心管(無蓋)。
C6流式細(xì)胞儀系統(tǒng)設(shè)計(jì)小巧靈便(17.3寸寬x16.3寸深),可在任何實(shí)驗(yàn)室配備。重量不到30磅,可方便移動,這是其他同種產(chǎn)品所不能達(dá)到的。
C6對電源電源(110V-240V、50-60HZ)沒有特殊要求,不需要增加任何電源控制設(shè)備。
如果樣品比較多,可選配自動進(jìn)樣裝置。
Cflow操作分析系統(tǒng),能簡單快速的搜集分析數(shù)據(jù),具有優(yōu)良人機(jī)界面,研究人員經(jīng)過半個小時(shí)的培訓(xùn),就可以靈活、準(zhǔn)確的使用C6流式細(xì)胞儀系統(tǒng)。
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