BD C6流式細胞儀

流式細胞儀主要有兩個基本的用途：*是可以定量分析鑒定活細胞表面表達的特異分子，第二是進行特定的活細胞群的分離和純化。

1.  免疫細胞群的分類靜止淋巴細胞之間從其外觀形態(tài)難以區(qū)分，都是以致密的核及少量細胞質(zhì)組成的小而圓的細胞為特征。然而，這些細胞確是由功能各異的不同細胞亞群所組成，各種細胞群表達各自特殊的表面分子。例如，B淋巴細胞上表達有特異的膜表面免疫球蛋白（mIg），而成熟的T淋巴細胞表面表達特異的CD3分子。T淋巴細胞又可進一步按其表達的不同表面標志細分成不同的亞群，如CD4+CD8-和CD4-CD8+亞群。因此，可由這些特征性的表面標志，將細胞分為不同的群或亞群。

2.  免疫細胞的分化發(fā)育免疫細胞分化發(fā)育的不同階段，其表面標志也在不斷地發(fā)生著變化。如胸腺細胞（發(fā)育過程中的T淋巴細胞），在發(fā)育的不同階段從不成熟到成熟，其表面標志經(jīng)歷了從雙陰性（CD4-CD8-）到雙陽性（CD4-CD8-），直到單陽性（CD4+CD8-或CD4-CD8+）的過程。正常生理狀態(tài)下，發(fā)育不同階段的胸腺細胞以一定的比例存在于胸腺中。通過檢測這些標志，即可判定某些因素（基因突變等）對胸腺細胞發(fā)育的影響。

3.  免疫細胞的分子表達免疫細胞的不同因素的影響下，其表達的分子也會發(fā)生變化。通過檢測這些分子的變化，可分析細胞功能以及細胞分化狀態(tài)等。例如，靜止的T淋巴細胞不表達或低水平表達CD69分子；而一經(jīng)活化，其表達CD69分子數(shù)量明顯增加。因此，可通過檢測這些活化標志的變化來判定細胞狀態(tài)以及研究影響細胞活化狀態(tài)的因素。

BD C6流式細胞儀
4.  免疫細胞的分離如前所述，免疫細胞是一組極不均一的群體。所以在研究免疫細胞功能時，常常需要把某些特異的細胞分離和純化。雖然免疫細胞分離的方法很多，但用FACS來純化特定的細胞群是目前為有效和方便的手段。例如，近頗受關(guān)注的CD4+CD25+T淋巴細胞是一群具有免疫調(diào)節(jié)（免疫抑制）功能的細胞群。在對其特點及功能進行研究時，首要的問題是分離該細胞群。用相應(yīng)的單克隆抗體與其結(jié)合，再用FACS進行分離，就能得到純度很高CD4+CD25+T淋巴細胞細胞群。而其他分離方法不僅分離過程煩瑣，也很難控制無菌條件及保證細胞純度。

BD C6流式細胞儀（flowcytometer）是一種能夠探測和計數(shù)以單細胞液體流形式穿過激光束的細胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細胞標志示蹤物質(zhì)為熒光標記物，因此，用來分離、鑒定細胞的流式細胞儀有被稱為熒光激活細胞分類儀（fluorescenceactivatedcellsorter，F(xiàn)ACS），是分離和鑒定細胞群及亞群的一種強而有力的應(yīng)用工具。

其原理是在一組混合的細胞群中，加入特異的針對特定靶細胞表面分子的熒光標記單克隆抗體，這種特異單克隆抗體與其對應(yīng)的抗原靶分子結(jié)合，結(jié)合后的熒光標記抗體停留在特定細胞的表面，稱為熒光抗體標記的靶細胞；將含有被標記細胞的混合細胞群混懸在一定容積的上樣緩沖液中，再通過FACS的進樣吸管孔，儀器就會將細胞懸液制成以單細胞排列的微細流束。

當(dāng)每一個細胞通過儀器的激光束照射時，帶在細胞上的熒光就會被相應(yīng)的激光束激活并發(fā)出對應(yīng)的熒光，通過敏感的光電倍增管即可檢測到從細胞表面發(fā)出的熒光。根據(jù)測得的散射光（scatteredlight）可得到細胞大小及顆粒狀態(tài)的信息；而從熒光的發(fā)射強度（fluorescenceemissions）則提供了結(jié)合在細胞上的抗體信息，進而也被反映了該細胞表面相應(yīng)分子的表達情況。

在流式細胞儀分離裝置中，返回到計算機的信號，可用來產(chǎn)生一種電荷，這種電荷以特定準確的時間通過FACS的吸管孔，在與吸管孔的液體流相相遇時，可將液體流打碎成只含一個細胞的微滴。含有電荷的微滴就會從主液體流中偏移，穿過一雙極板。帶正電荷的微滴被吸引至陰極，而帶負電荷的被吸引至陽極。以這種方式，特定的細胞亞群由于標記著不同的熒光抗體而帶有不同的電荷，從而將目的細胞從混合的細胞群中分揀出來。